(1. Key Lab of Tobacco Chemistry of Yunnan Province, Yunnan Acedemy of Tobacco Science, Kunming 650106; 2. Technology Center of Hongyun and Honghe Group, Kunming 650202) Abstract A new method for the determination of leaf pigments in tobacco by ultra-performance liquid chromatography was studied. The leaf pigments were extracted from the tobacco sample by high-speed homogenization with acetone. Then they were separated on a Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 (2.1 ´ 50 mm, 1.7 m m) column with acetonitrile and water gradient elution as mobile phase at a flow-rate of 0.6 mL/min. The six leaf pigments were achieved a baseline separation within 3.0 min. The recoveries of leaf pigments were 94~ 105%, and relative standard deviations were 2.2~ 3.2%. This method was applied to the determination of leaf pigments in tobacco with good results. Keywords ultra-performance liquid chromatography; leaf pigments; tobacco; high-speed homogenization 超高效液相色谱法测定烟草样品中的植物色素 汤丹俞 1,2;曾晓鹰2;者 为2;杨光宇1;胡秋芬 1(1.云南省烟草化学重点实验室,云南烟草科学研究院,昆明 650106;2. 红云红河集团技术中心,昆明 650202) 摘要
研究了用超高效液相色谱法测定烟草样品中的植物色素;烟草样品中的植物色素用丙酮匀浆法提取,然后以Waters
ACQUITY UPLCTM BEH C18 (2.1 ´ 50 mm, 1.7 mm)色谱柱为固定相,乙腈-水梯度洗脱为流动相,检测波长为450
nm。在该条件下,烟草中几种主要的色素在3.0 min内达到完全分离,方法标准回收率为94~ 105%, RSD为2.2~ 3.2%,结果令人满意。
植物色素是烟草生长和利用太阳能进行光合作用的重要物质;它对烟叶的色泽和香味也有重要影响,烟叶调制过程中色素降解完全和得当,会使烟叶香气增加,色泽上等。因此烟草中植物色素的准确测定对烟草质量评价具有积极的意义
[1,2]。烟草色素的测定常用分光光度法和高效液相色谱法[3~ 5],但是光度法准确性较差,传统的液相色谱法分析时间较长。 1. 实验部分 1.1. 主要仪器和试剂 Waters ACQUITY UPLC超高效液相色谱系统,包括四元泵、自动进样器、二极管阵列检测器和Empower色谱工作站。 水为石英亚沸蒸馏水并用Milli-Q50超纯水仪处理,电阻³ 18 mW .cm; 乙腈和丙酮均为色谱纯进口试剂(Fisher公司生产);叶绿素-a、叶绿素-b、叶黄素、b-胡萝卜素、新叶黄素和脱镁叶绿素标准(购于Sigma公司和Fluka公司生产,含量>97%)。 1.2. 色谱条件 色谱柱为Waters ACQUITY UPLCTM BEH C18 (2.1 ´ 50 mm, 1.7 mm);流动相为乙腈-水梯度洗脱,以体积比按0 min (乙腈90%+10%水), 2.0 min (100%乙腈)的梯度条件,流速为 0.6 mL/min,检测波长为 450 nm,该色谱条件下标样和烟草样品的色谱图见图1。 图1 烟草样品(a)和色素标样(b)色谱图 (1) 新叶黄素,(2) 叶黄素,(3) 叶绿素-a,(4)叶绿素-b,(5) 脱镁叶绿素,(6) b -胡萝卜素 1.3. 样品处理 2. 结果与讨论 表1 回归方程、相关系数及检测限
2.4 回收率实验及精密度
2.5 样品分析结果 表3 样品分析及结果
REFERENCES [3] 张槐苓,葛翠英,穆怀静等,毛多斌. 烟草分析与检验[M]. 郑州: 河南科技出版社. 1994(第一版 ):46. [4] 田海英,韦凤杰,张东豫,郭 平,张弘韬,李世勇. 烟草科技. 2009,18(4):32-36. [5] 施红林,王保兴,刘巍,王岚,李忠,蒋次清,杨光宇. 中国烟草学报. 2003,9(2):1-5. [6] 甘宾宾, 蔡卓, 蒋世琼, 汤艳荣, 赵静. 中国卫生检验杂志. 2008,28(5):279-282. [7] 刘芳,杨柳,孙林,张霞,缪明明,丁中涛. 中国烟草学报. 2008,14(6):1-5. [8] 刘正聪,陆舍铭,刘春波,招云芳,王海利,李晋明,缪明明. 化学工程师. 2008,22(12):43-45. [9] 陈子雷,张 红,王文博,丁蕊艳,杜红霞,杨国生. 中国卫生检验杂志. 2006,16(12):1228-1231. [10] Biradar. S. V, Patil. A. R, Sudarsan. G. V, Pokharkar. V. B. Powder Technology, 2006, 169(1): 22-32.
|