Determination of digoxin in solid lipid nanoparticles by HPLC

Hu Liandong¹, Jia Huiqing¹, Yang Gengliang^{1, 2}
(¹ College of Pharmacy, Hebei University, Baoding 071002; ² Molecular Science Center, Institute of Chemistry, China Academy of Science, Beijing 100080, China)

Abstract A HPLC method was established for the determination of digoxin in solid lipid nanoparticles. Venusil XBP-C₁₈ column was used with acetonitrile-water (46: 54) as mobile phase, and the flow rate was 1.0 mL·min^-1. The detecting wavelength was 230 nm, and the injection volume was 20 mL. There was a good linear relationship (r = 0.9999) when digoxin was 10-100 mg·mL^-1. The average recovery was 100.05%, and RSD was 0.19%. The method was simple and accurate. It could be used for determination of digoxin in solid lipid nanoparticles.
Keywords digoxin; solid lipid nanoparticles; HPLC; determination

HPLC法测定地高辛固体脂质纳米粒的含量

胡连栋¹，贾慧卿¹，杨更亮^{1, 2}
（河北大学药学院，河北保定 071002; ²中国科学院化学研究所分子科学中心，北京 100080）

摘要 建立HPLC法测定地高辛固体脂质纳米粒的含量。用Venusil XBP-C₁₈柱；流动相：乙腈-水（46：54）；流速：1.0 mL·min^-1；紫外检测波长：230 nm；进样量：20 mL。地高辛在10～100 mg·mL^-1范围内呈良好的线性关系r = 0.9999, 回收率100.05%，RSD为0.19%。方法简便、准确,可用于地高辛固体脂质纳米粒含量的测定。
关键词 地高辛；固体脂质纳米粒；高效液相色谱法；含量

    地高辛是从毛花洋地黄中提纯制得的中效强心苷，对各种急、慢性心功能不全及室上性心动过速、心房颤动和扑动等均有较好的疗效。固体脂质纳米粒是一种新型靶向制剂，目前尚处于实验室研究阶段，国内外药典均未收载。本文建立了自制的地高辛固体脂质纳米粒的HPLC含量测定方法，结果表明该方法操作简便，回收率和专属性高，重现性好。

1 实验部分
1.1 仪器与试药
    FL-2200型高效液相色谱仪，FL-9500色谱工作站。地高辛对照品（中国药品生物制品检定所），地高辛固体脂质纳米粒分散液（自制，浓度约为0.1 mg·mL^-1），乙腈为色谱纯，其它试剂为分析纯。
1.2 色谱条件         
    色谱柱：Venusil XBP-C₁₈柱（250 mm × 4.6 mm，5 mm）；流动相：乙腈-水（46：54）；流速：1.0 mL·min^-1；柱温：室温；检测波长：230 nm；进样量：20 mL。
    在上述条件下，地高辛与溶剂及杂质峰可有效分离，紫外检测器记录的色谱图见图1。
　
     A                   B              C
图1 高效液相色谱图
A：溶剂；B：对照品；C：供试品
1：溶剂峰；2：地高辛峰
Fig.1 HPLC chromatograms
A: solvent; B: chemical reference substance; C: sample
1: peak of solvent; 2: peak of digoxin

2 结果与讨论
2.1 线性关系  
    精密称取地高辛对照品25.0 mg，置100 mL容量瓶中，用95%乙醇溶解并定容，摇匀，作为对照品溶液。分别精密量取该溶液1.0、2.0、3.0、5.0、8.0、10.0 mL，置25 mL容量瓶中，加乙醇定容，摇匀。分别进样20 mL，记录色谱图。浓度（c）在10～100 mg·mL^-1与峰面积（A）线性关系良好，得回归方程：A = 568.78c-947.58，r = 0.9999。
2.2 最低检出量测定
    当信噪比为3：1时，最低检测量为3 ng。
2.3 精密度实验        
    取样品溶液一份，重复进样5次，测定峰面积，其RSD = 0.26%。
2.4 重复性实验    
    取同一批供试品5份，精密称定，按“含量测定”项下的方法测定，结果含量的RSD为0.32%，表明方法重现性良好。
2.5 稳定性实验
    将供试品溶液在室温下放置，分别于2、4、8 h取样，按“含量测定”项下的方法测定，测定，记录其峰面积，测得地高辛的含量基本不变。
2.6 回收率试验    
    精密量取10.0 mL地高辛固体脂质纳米粒分散液，置50 mL容量瓶中，加95%乙醇溶解，精密加入对照品溶液5.0 mL，用乙醇定容，摇匀，0.45 mm滤膜过滤，测定续滤液的含量，得回收率为100.05%，RSD = 0.19%，n = 6。
2.7 样品含量测定            
    精密量取3批自制样品各10.0 mL，置50 mL容量瓶中，加乙醇超声使之溶解，并用乙醇定容，摇匀，0.45 mm滤膜过滤，取续滤液，20mL进样，记录色谱图，由峰面积计算含量，并用含地高辛20 mg·mL^-1的溶液作对照品溶液，测定结果见表1。

表1 供试品含量测定结果
Table 1 Results of tablets determination in sample

3 结论
3.1 对地高辛对照品溶液进行紫外扫描，发现波长在220 nm处有最大吸收，但考虑到辅料的影响，最终选定230 nm作为测定波长。
3.2 若按中华人民共和国药典中色谱条件测定^[1]，地高辛出峰时间约为11.4 min，且有明显拖尾。笔者同时也参考了相关文献^[2,3]，通过比较不同流动相（乙腈-水：32：68、35：65、40：60、50：50、46：54、）及流速（0.8、1.0、1.2、1.5 mL·min^-1）等，确定了比较合适的流动相及流速，出峰时间提前了约8 min，并且溶剂出峰时间约为2.2 min，对地高辛峰无干扰，不仅节约了时间，而且也节省了实验成本，为以后地高辛固体脂质纳米粒的制剂开发提供了一种简便、快捷的含量测定方法。

REFERENCES          
[1] Chinese Pharmacopeia (Zhongguo Yaodian). The Pepoles Republic of China national pharmacopeia committee. The second section. Beijing. Chemical Industry Publishing Company, 2005: 182.
[2] Ou Yang X M, He Y M. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis (Yaowu Fenxi Zazhi), 2004, 24(2): 213-214.
[3] Song M, Li M, Hu X Y. Chinese Journal of Pharmaceutical Analysis (Yaowu Fenxi Zazhi), 2004, 24(3): 331-333.

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