Application of chemiluminescence to determinate trace nitrite
Gao Qi, Niu Caoyuan
(Collage of Basic Science, Henan Agricultural University, Zhengzhou 450002, China)
Abstract In acidic medium NO₂^- oxidize [Fe(CN)₆]^4- to [Fe(CN)₆]^3-, and uric -[Fe(CN)₆]^3-- luminol chemiluminescence reaction was coupled together, thus a new method indirect determination of nitrite was found. The effect of factors as consistency of various substance of reaction , acidity, disturb ions etc, on the analytical results studied. Under optimal condition, the linear range for the determination of NO₂^- was 1.0×10^-9 - 1.0×10^-5g/ mL and the detection limit was 5.0×10^-11g/ mL, the relative standard deviation for the determination of samples (n=11) was 1.9 - 3.3%.The method is simple、convenient、sensitive and selective, and the recovery was between 94.45 - 105.5% .It was applied to determination of trace nitrite in water samples of environment with satisfactory results.
Keywords Nitrite, Uric acid, Coupling chemiluminescence, Water samples of environment

高 岐 牛草原
（河南农业大学基础科学学院，郑州 450002）

2002年6月18日收稿

摘要 亚硝酸盐在酸性介质中氧化亚铁氰化钾为铁氰化钾,本文将其和鲁米诺-尿酸化学发光反应偶合起来，建立了一种间接测定亚硝酸盐的新方法。讨论了酸度、反应物浓度、干扰离子等因素对结果的影响。方法的检出限为5.0×10^-11g/ mL ,对环境水样样品进行了平行测定（n=11），其相对标准偏差为1.8～3.2%，线性范围为 1.0×10^-9～1.0×10^-5g/ mL ，回收率为94.30～105.3%。方法简便，易于操作，并具有较高的灵敏度和选择性，结果令人满意。
关键词 亚硝酸盐,尿酸，偶合化学发光，环境水样

    亚硝酸盐是一种有毒的物质，它还能与仲胺类物质生成亚硝胺而致癌。因此，亚硝酸盐含量的测定倍受大家的关注，是环境、卫生、食品、纺织等行业中重要的监测项目之一，建立一种灵敏、高效、简便、准确、快速测定亚硝酸盐的方法显得尤为重要。目前，测定微量亚硝酸盐的方法主要有Griess法、催化光度法、极谱法等。但利用尿酸-铁氰化钾-鲁米诺化学发光法测定痕量亚硝酸盐方法至今还未见报道。本文基于在酸性介质中，NO₂^-将亚铁氰化钾氧化为铁氰化钾，尿酸对其有一定的增强作用，从而建立了一种鲁米诺-铁氰化钾-尿酸间接测定亚硝酸盐的化学发光分析新方法。该方法快速、简便、灵敏、选择性好。方法的检出限为5.0×10^-11g/mL ,校准曲线的线性范围为1.0×10^-9～1.0×10^-5g/mL。用于样品中亚硝酸盐含量的测定，结果令人满意。

1 主要仪器与试剂
    YHF-型液相化学发光仪（西安无线电八厂），SYZ-A型石英亚沸高纯水蒸馏器（江苏金坛医疗仪器厂）。尿酸溶液(5.0×10^-2g/ L):称取0.0500g尿酸，用水溶解,定容1000 mL；亚铁氰化钾溶液（0.10 mol/L）；鲁米诺溶液（1.0×10^-3 mol/ L）:称取0.0886 g鲁米诺及10.0 gNaOH，用水溶解后定容500 mL；NO₂^-贮备液（1.0000 g/ L）：以亚硝酸钠配制，使用时逐级稀释；EDTA（5.0×10^-3 mol/ L）；NaOH（0.5 mol/L）；HCL（0.06 mol/）。以上所用试剂均为G·R或A·R级，所用水为石英亚沸两次蒸馏水。

2 实验方法
2.1 鲁米诺分析液的制备
    吸取5.00 mL尿酸溶液、10.00 mL鲁米诺溶液，用0.5 mol/L 的NaOH溶液定容50 mL。
2.2 NO₂^-分析液的制备
    吸取5.00 mL不同浓度的NO₂^-标准溶液、10.00 mL亚铁氰化钾溶液、3.00 mL EDTA溶液、5.00 mLHCL溶液定容50 mL。
2.3 校准曲线的绘制
    取鲁米诺分析液5.00 mL，由试剂管加入到化学发光仪的反应池中，取NO₂^-分析液3.00 mL于试液贮管中，平稳快速地打开试液贮管活塞，把试液加入到反应池中，记录反应的发光峰信号，以峰高定量，绘制校准曲线。

3 结果与讨论
3.1 条件实验
3.1.1 尿酸浓度的选择 尿酸是该发光体系的增强剂，一定条件下，随着尿酸浓度的增加，发光强度增加。实验发现，尿酸浓度为5.0×10^-6g/L时，发光强度最大，之后趋于平稳。所以，尿酸浓度选择为尿酸浓度为5.0×10^-6g/L。
3.1.2鲁米诺浓度的选择 鲁米诺是体系的发光剂，随着鲁米诺浓度的增加，发光强度增大，但基线也会随之而增高。考察实验浓度范围内，鲁米诺浓度对发光强度的影响。当其浓度为2.0×10^-4mol/L时，信噪比最大，亦趋于稳定，据此选择鲁米诺浓度为2.0×10^-4 mol/L。
3.1.3 亚铁氰化钾浓度的选择 亚铁氰化钾在体系中做背景抑制剂^[3]和还原剂。实验发现，随着亚铁氰化钾浓度的增加，噪音降低，信噪比升高，亚铁氰化钾浓度为0.10 mol/L时，发光强度最大。
3.1.4 酸度的选择 NO₂^-氧化亚铁氰化钾需要在酸性溶液中进行^[4]，而铁氰化钾氧化鲁米诺要在碱性介质中进行。实验表明，NO₂^-氧化[Fe(CN)₆]^4-时，HCL的浓度为0.06mol/L、[Fe(CN)₆]^3-氧化鲁米诺时，NaOH的浓度为0.5 mol/L时，结果理想。
3.2 干扰试验
    依据实验方法，进行了常见离子对测定结果的影响试验，结果表明，当NO₂^-浓度为1.0×10^-7g/ mL时，5000倍的K⁺、Na⁺、Ca²⁺、Mg²⁺、Al³⁺、Zn²⁺、Fe³⁺、Cu²⁺不干扰测定，1000倍的Cl^-、Br^-、100倍的S^2-、Mn²⁺对测定不干扰。

表1  回归方程及其测定参数
Table 1 Linear range and regressive equations of the calibration curves and instrumental parameters

表2 样品分析结果
Table 2 Results of analysis for samples

3.3 校准曲线和检出限
    在选定的最佳实验条件下，NO₂^-在1.0×10^-9～1.0×10^-5g/mL范围内，化学发光强度与NO₂^-浓度呈较好的线性关系。为了提高分析测定的准确度和灵敏度，校准曲线按NO₂^-浓度的数量级分段绘制，基本参数列入表1。以 3倍空白信号的标准偏差计算方法的检出限为5.0×10^-11g/mL 。
3.4 样品分析
    取郑州市食品厂废水、西流湖、贾鲁河、北郊池塘、金水河、熊耳河水样，用玻璃砂芯漏斗过滤，除去颗粒状杂质后，按实验方法进行测定，同时进行标准加入法回收率实验，结果列于表2。

REFERENCES
[1] Wei F S. Guide of monitoring analysis method of water and waste water (Shui He Fei Shui Jiance Fenxi Fangfa Zhinan). Beijing: Environmental science publishing house of China, 1990, 156.
[2] Zhou R G. Anal. Chem. (Fenxi Huaxue),1992, 20 (10): 1229.
[3] Deng X L. Anal. Lab. (Fenxi Shiyishi), 1999, 18 (4): 63.
[4] Bai L S, Ce Z H. Anal. Chem. (Fenxi Huaxue). 2001, 29 (8): 926.

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