-hydaro-xyisovaleryl
shikonin)、异戊酰紫草素(isovaleryl shikonin)、去氧紫草素(deoxy shikonim)等。该色素具有显著的抗生育、抗菌消炎、抗病毒、抗肿瘤、保肝和免疫调节等作用,同时它也是名贵的染料,色泽鲜艳、性能稳定、无毒、食用安全性高、无任何副作用,可广泛应用于食品、化妆品、医药等行业,并可用做防晒塑料着色剂。由于自然资源迅速减少,人工种植难度大,紫草在市场上一直供不应求。本文拟对国内紫草的各种提取方法做一阐述,希望有益于紫草色素的开发利用。
1 醇提法
传统的醇提法是乙醇冷浸法。霍文兰[2]采用乙醇作浸泡液,提取的工艺流程为紫草→粉碎→冷浸→过滤→色素浓缩→烘干→色素固形物(紫草色素)
,回收率为5.52%。
刘晓华等[3]用95%乙醇作提取溶剂,比较了不同的提取方法,得到回流提取比索氏提取、超声提取、浸泡提取收率要高,并采用正交设计对提取工艺进行优化,结果为用20倍量95%乙醇在60℃浸提两次,时间为4h、2h,如提取温度超过60℃,紫草素的破坏程度会加大。
陈敏等[4]用均匀设计法优选了紫草素的提取工艺,用新疆紫草,选择乙醇浓度、用量、渗漉时间及浓缩温度4个因素,将各因素分成5个水平,观察了不同因素对提取紫草素含量的影响。结合工业生产实际定出最佳工艺,认为乙醇浓度为85%,渗漉时间为3h,乙醇用量为生药量的8倍,薄膜浓缩乙醇提取液的温度为60℃,紫草素的得率最高。在优选的工艺条件下提取的紫草素含量高于中国药典规定的0.90%,阐明了此工艺有一定的应用价值。
2 油浸法
油浸法是外用制剂中提取紫草素常用的方法。张继平等[5]用正交试验法优选了紫草油的提取工艺,溶媒用花生油,选用L8(27)正交试验设计,以提取时间、粉碎度、提取油量、提取温度为考察因素进行了试验,结果认为最佳提取时间为1h,紫草粉碎度为1cm小段,加4倍量花生油,提取温度低于150℃为宜。
王阳等[6]采用麻油为提取溶剂,130~135℃提取13min,在制备时间缩短的情况下,仍达到了该制剂质量标准的要求。
3 石油醚提取
李立荣等[7]用索式提取器以石油醚为溶剂,于30~60℃提取紫草中的紫草素4h,并与乙醇(95%)提取法进行了比较,结果表明,石油醚法提取紫草素得率优于乙醇提取法。但石油醚法有机溶剂含量较大,成本高,且易挥发而影响工作环境;乙醇提取法得率虽低,但投资少,所需设备简单,提取溶媒价廉且无毒副作用,可用于大规模生产。
4 超临界萃取法
超临界流体萃取(supercritical
fluid extraction,简称SFE)是近几年发展起来的新型提取技术,以CO2为流体的超临界CO2萃取(CO2临界温度为Tc=31.05℃,临界压力为Pc=7.37MPa,本身呈惰性,价格便宜)因其安全无毒,制取费用低,产品纯度高,能保持原有的品质,在食品、香料、医药深加工等领域具有其独特的优越性。
马丽萍等[8]以滇紫草为原料,用超临界CO2萃取技术提取紫草素,在萃取压力为20MPa、萃取温度35℃条件下,采用等温变压二级分离,紫草素收率达1.82%。梁瑞红等[9]用超临界CO2萃取新疆紫草中萘醌色素,温度在32℃、压力27MPa下紫草素衍生物得率最高可达3.59%。
并且与用有机溶剂无水乙醇、乙酸乙酯和氯仿采用提取温度60℃,固液比10∶1,提取时间为3h的结果进行了比较。两种方法相比得出的产品萘醌色素的组成和含量都有差异,超临界CO2萃取的紫草色素含杂质少,并且含有更多色素组分,含量更高,全过程仅需2.5~3h,产品色质好,避免了用有机溶剂萃取的溶剂残留等问题。
5 从紫草细胞培养液中提取色素
由于野生紫草资源贫乏,引种栽培亦较困难,故需要探索获得大量紫草的新途径。利用细胞培养获得有用的化合物是解决资源贫乏、克服化学合成弊病的重要途径。
对紫草细胞培养生产紫草色素时,会有一部分紫草色素外溢到培养液中,色素颗粒位于原生质膜和细胞壁之间,如果不移出(分泌出)细胞外,就会阻碍紫草色素的进一步合成,降低其单位产量和增加生产成本,由于培养液体积大,产物含量低,因此如何将色素加以回收就成为该技术产业化的关键之一。罗雪梅等[10]分别采用萃取法、沉淀法、吸附法研究色素回收问题,发现用沉淀法、吸附法代替传统萃取法提取培养液中的紫草色素,可使紫草细胞培养生产紫草色素产物提取等下游过程工艺简化,收率提高,成本降低。他们采用树脂R-A吸附回收紫草细胞培养液中的紫草色素,与传统石油醚萃取法相比有机溶剂节约50倍,且操作简便,生产设备缩小[11]。谢文化等[12]从多种大孔树脂中筛选出X-5、AB-8两种树脂,它们对紫草色素具有较好的吸附能力,同时对糖吸附弱,多次高温灭菌后进行的吸附实验显示其吸附性能变化不大。康强胜等[13]研究了几种大孔吸附树脂对紫草色素的吸附提取,结果表明NKA-Ⅱ具有较高的吸附量,且易于解吸,适于新疆紫草细胞大量培养过程中用于对紫草色素的吸附分离。方德秋等[14]研究发现不同的pH值、激素对紫草悬浮培养细胞生长有影响,袁丽红等[15]发现多糖对生长也有影响。
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