http://www.chemistrymag.org/cji/2008/107037nc.htm

Jul. 1, 2008  Vol.10 No.7 P.37 Copyright cij17logo.gif (917 bytes)

Determination of residual nitrobenzene in milk slice by gas chromatography

Shang Chuang1, Yang Gengliang1, 2 , Wei Chunliang1, Li Li1
(1 College of Pharmacy, Hebei University, Baoding 071002, China; 2 Key Laboratory of Pharmaceutical Quality Control, Hebei , Baoding 071002, China)

Abstract Objective To develop a capillary gas chromatography method for the determination of nitrobenzene in milk slice. Method Nitrobenzene was extracted by benzene. The analysis was performed on a SE-54 capillary column. The detector is FID. The temperature was elevated from 70-120ºC,10.00ºC·min-1,120ºC maintains 3min, 120℃-220ºC, 20.00ºC·min-1,220ºC maintains 3min. The carrier gas was N2. The flow rate was 2.0 mL·min-1. Result Nitrobenzene was linear within the range from 0.2976 to 0.7737mg·mL-1. The standard regression equation: Y = 30395x - 303.1, r=0.9994. The average recovery was 99.3％. Conclusion This method has high sensitivity, good reproducibility and convenient for operation. The result is reliable and it provides nitrobenzene was accurate detected qualitatively and quantitatively by this method.
Keywords Gas chromatography; Nitrobenzene; Benzene

奶片中硝基苯残留的气相色谱检测

商闯1, 杨更亮1,2，魏春亮1，李莉1
（1河北大学药学院，河北 保定 071002；2河北省药物质量研究重点实验室，河北 保定 071002）

摘要 目的 建立一种方便、快速、灵敏的毛细管气相色谱检测奶片中硝基苯的方法。方法 用苯做萃取剂提取硝基苯；采用毛细管色谱柱SE-54；FID检测器；程序升温：70-120℃，10.00℃·min-1，120℃保持3min，120℃-220℃,20.00℃·min-1，220℃保持3min；载气：氮气；流速：2.0mL·min-1。结果 硝基苯的线性范围02976~0.77370μg·mL-1；标准回归方程：Y = 30395x - 303.1，r=0.9994，平均加样回收率99.3％。结论 该方法灵敏度高，重现性好，操作方便，结果可靠，能够准确地对奶片中的硝基苯进行定性和定量检测。
关键词 气相色谱；硝基苯；苯

    奶片早在二十世纪六十年代初欧洲工业发达的国家就已有了生产，我国于二十世纪八十年代初引进该项技术[1]。奶片具有携带方便、食用简单、营养美味等优点，因此深受广大群众的喜爱，但是由于各种有机化学农药的滥用及环境污染的加剧，使其在原料生产和加工过程中受到有机化合物的污染，其中尤以苯系物中的硝基苯污染较为普遍。硝基苯是一种无色或微黄色具苦杏仁味的油状液体，难溶于水，易溶于乙醇、乙醚、苯和油[2]。硝基苯主要毒作用包括：①形成高铁血红蛋白。②硝基苯进入人体后，经过转化产生的中间物，可使维持细胞膜正常功能的还原型谷胱甘肽减少，从而引起红细胞破裂，发生溶血。③硝基苯可直接作用于肝细胞致肝实质病变，引起中毒性肝病、肝脏脂肪变性，严重者可发生亚急性肝坏死。④急性中毒者还有肾脏损害的表现，此种损也可继发于溶血。空气中的硝基苯用硅胶吸附后进行检测[3]，我国国家标准(GB13194-91)规定用气相色谱法检测水中的硝基苯[4]。在目前的相关报道中未有对奶制品中硝基苯污染物进行检测的报道，对奶源进行检测的文献较多，但是由于环境因素影响以及生产工艺的问题，奶制品（如：奶片等）的生产过程中极易受到有机化合物污染，为了监测奶制品的食品安全，以及保护消费者的健康不受影响，因此开展了本次试验研究。本试验研究了气相色谱法检测奶片中硝基苯的分析条件，应用该方法检测了市售八大厂家生产的二十六种奶片商品。

1 材料与方法
1.1 仪器
    高效气相色谱仪(Agilent 6820)，分析天平，高压灭菌器，高速离心机，水浴锅，酸度计，超声波清洗器。
1.2 试剂与药品
    硝基苯(分析纯)、苯(色谱纯)、盐酸(0.1mol·L-1)、乙酸钠、无水碳酸钠、淀粉酶、蛋白酶、乙醇。
1.3 样品
    市售八厂家二十六种奶片商品。
1.4 标准曲线与线性范围的测定
    准确称取硝基苯6.2mg，用色谱纯苯定容到100 mL，配置成浓度为62.0μg·mL-1的溶液作为储备液，然后将储备液稀释成浓度分别为0.01488μg·mL-1、0.02976mg·mL-1、0.07688mg·mL-1、0.15370mg·mL-1、0.31000mg·mL-1、0.77370mg·mL-1的工作液，进行气相色谱检测，根据结果绘制标准曲线。
1.5 样品的处理
    将50g奶片溶于在100 mL超静水中，取溶液5 mL于25 mL容量瓶中，加入0.1mol·L-1盐酸5 mL，115℃高压灭菌20 min。冷却后用醋酸钠溶液调至pH 4.5，加入淀粉酶和蛋白酶各0.1 g，37℃酶解2 h.，然后定容至25ml，过滤后取滤液5 mL于10 mL离心管中，加入2.5 mL色谱纯苯，超声震荡后于40℃水浴锅中静置分层。吸取上层清液1.5 mL于试管中，用0.5 g无水碳酸钠除水，4000 r·min-1离心5 min，取上清液1 mL于2 mL EP管中，用色谱纯苯定容到2 mL，用于气相色谱检测。
1.6 回收率与精密度的测定   
    分取5ml奶片溶液5份，分别加入10mL、20mL、40mL和80mL硝基苯储备液，得到浓度分别为0.1240mg·mL-1、0.2480mg·mL-1、0.4960mg·mL-1和0.9920 mg·mL-1奶样，按照奶样处理方法处理后用气相色谱检测，计算回收率。
1.7 最低检测限与最低定量限的确定            
    以信噪比3(S/N=3)测量最低检测限，以信噪比6(S/N=6)测量最低定量限。
1.8 气相色谱条件
    色谱柱：SE-54；长度：50.0m；膜厚：0.33um；直径：320um；进样口温: 200℃；检测器温度: 300℃；初始温度: 70 ℃; 初始时间：2.00 min；平衡时间：1.00 min；程序升温：70-120℃，10.00℃·min-1，120℃保持3min；120℃-220℃，20.00℃·min-1，220℃保持3min；载气：氮气；流速：2.0mL·min-1。

2 结果与讨论
2.1 溶剂的选择
    本试验先后采用乙醚、正己烷和苯等作为萃取溶剂，萃取奶片水溶液中的硝基苯，经过比较,苯的萃取效果最好，气相色谱易于分离。
2.2 样品的色谱行为
    该方法得到的储备液气相色谱见图1，硝基苯峰的保留时间为5.034 min。

图1 苯和硝基苯的色谱图
1：苯 2：硝基苯
Fig.1 Chromatogram of nitrobenzene and benzene
1: benzene 2: nitrobenzene

2.2 线性范围和检出限             
    将不同浓度的标准工作液依次上机测定，以浓度为横坐标，以峰面积为纵坐标作标准曲线。


                浓度 Concentration (mg·mL-1)

图2 苯中标准品的标准曲线
r=0.9994说明在0.02976-0.77370mg·mL-1的浓度范围内呈良好的线性关系，该标准曲线可以用于定性或定量分析。
Fig.2 Standard curve of standard preparation in benzene

2.3 回收率    
    按照1.5方法提取并测定一份空白奶片溶液作对比，依据1.6测定方法，准确量取5ml奶片溶液5份，提取并测定。结果列入表1。

表1 回收率实验结果
Table 1 Results of recovery

编号

Number

加入量
Added
(ug)

测得量
Found
(ug)

回收率Recovery
(%)

平均回收率Average recovery  (%)

1

0.6200

0.6169

99.5%

99.3%

2

1.2400

1.2276

99.0%

3

2.4800

2.4626

99.3%

4

4.9600

4.9054

98.9%

5

9.9200

9.8902

99.7%

    由表1可以得到，该方法样品回收率均大于98.5%以上，具有高准确度。

2.4 最低检出限
    该方法最低检出浓度为0.01mg·mL-1，最低定量限为0.02mg·mL-1。
2.5 市场奶片商品检测
    采用该方法对市售八大厂家生产的二十六种奶片商品进行了检测，根据测定结果显示，奶片中未检出硝基苯，由此说明市售奶片未受到环境中硝基苯有机物的污染。

3 结论
    在试验前的样品处理中，由于奶片水溶液成分比较复杂，蛋白和脂肪含量较高，吸附硝基苯，所以不能单纯进行萃取，需要先水解样品，然后再进行酶解，使蛋白不再吸附硝基苯，然后再萃取，过滤分离，才可萃取完全。
    从本实验结果可以看出，样品中待测组分检测速度快、方法简便、线性好、回收率和精密度高，此方法适合于测定干扰物质比较多的奶制品等食品中硝基苯的含量。

REFERENCES
[1] 蒋爱民，朱小玲，朱耀武.中国奶牛，1994（5）：51～52
[2] Amoore J E,Hautala E.Appl Toxicol,1983(3):272-290
[3] Pendergrass S M.Am Ind Hyg Assoc,1994,55:733-737
[4] GB13194-91水质硝基苯、硝基甲苯、硝基氯苯、二硝基甲苯的测定气相色谱法.北京:中国标准出版社

　

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